اللعبة تحتوي علي العديد من الشخصيات ولكن سنلقي الضوء علي أهم الشخصيات المؤثرة في القصة وأحداث اللعبة وهم :
ديزموند : وهو البطل الرئيسي للعبة حيث يعود بالذاكرة إلي الماضي ليحصل علي أسرار المصنوعة اليدوية , كما يساعده طاقم تقني علي أعلي مستوي ليستطيع العودة بسهولة إلي الماضي.
إزيو : وهو البطل الفعلي للقصة وهو من مواليد عام 1459 في عصر النهضة الإيطالية وهو عضو من ترتيب القتلة والمغتالين الذين مروا على إيطاليا ، طبعا هو من أحفاد Altaï r بطل الجزء السابق وبطلنا هذا لم يعلم بأن عائلته لها موروث تناقلته جيلا بعد جيل إلا عندما كان يبلغ سبعة عشر عاما، رافق معرفته بهذا الميراث رغبة الانتقام لديه ممن قتل أباه واثنان من إخوته وقد هرب من فلورنس رفقة أحد أصدقائه ليلجأ هناك لفيلا خاصة بعائلته ، هناك تعلم فنون الاغتيال من عمه وبدأ رحلة الانتقام من قائد فرسان المعبد المعروف بـRodrigo Borgia الذي كان صاحب الأمر بقتل والد إزيو وإخوته ، خلال الوصول لغايته العظمى قام إزيو بتحقيق بعض الأهداف الجانبية كجمع المخطوطات التي كتبها Altaï r من قبل بالإضافة لأنه كان منقذا لـChristoffa Corombo كما أنه حرر البندقية ( المدينة الإيطالية ) وفلورنس عاصمة إيطاليا في ذلك الوقت من بطش فرسان المعبد كشف مؤامرة سميت بالعالم الجديد , وفي هذا الجزء تزداد رغبة إزيو في الانتقام من بورجيا بعدما تسبب في قتل عمه ماريو وتدمير المدينة.
ماريو : عم إزيو وقد قام بالهروب بإزيو من روما حتى لا يقتله بورجيا , وبالفعل ينجح في الوصول به إلي المدينة الجديدة , ولكن بورجيا يأتي خلفهم ويدمر المدينة ويقتل ماريو.
ماكفيلا : وهو أحد أعوان إزيو ويحاول أن يساعده ويوجه إي الأهداف التي لابد وأن يحققها , لذلك يعتمد عليه إزيو كثيرا في استكمال رحلته الانتقامية.
لافولبي : وهو نقيب اللصوص ويساعد إزيو من خلال سرقة الرسائل وقتل الأعداء , كما يساعده إزيو في ترميم منزله.
بورجيا : وهو العدو الأوحد لإزيو من الجزء السابق لأنه تسبب في قتل عائلته , كما تسبب في هذا الجزء في تدمير مدينة إزيو وقتل عمه , لذلك ستكون مهمة إزيو الرئيسية هي الانتقام من هذا الوغد الحقير ملك روما.
